六胺银染色液(改良Grocott-橙黄G法)
产品货号:M
产品规格:6×50ml/6×ml
产品简介:
六胺银染色液是一种经典显示基底膜的方法。经过Grocott改良之后,组织经铬酸氧化,使真菌内的黏多糖暴露出醛基,醛基把六胺银还原为黑色的金属银。氯化金可使金属银转变为更稳定的金属金,同时使背景更清晰。海波可以固定并洗去未还原的银离子。
本法采用橙黄G复染对各种真菌的显示效果都很好,特别是马尔尼菲青霉菌的显示特别好,但必须淡染橙黄G。如需显示曲霉和白色念珠菌,可选用苏木素或者伊红复染,可看到真菌与周围组织的关系。
产品组成:
操作步骤(仅供参考):
1.组织固定于甲醛固定液中,常规脱水包埋。切片4um,脱蜡至水洗。
2.切片入氧化剂氧化20min。流水稍洗。
3.入漂白液处理1min,以除去氧化剂。
4.流水冲洗5min,蒸馏水浸洗2次,每次30s-60s。
5.切片放入配制好的预热至60℃的六胺银工作液中,加盖60℃恒温染色大约20~60min,切片呈淡黄色即取出经水洗后显微镜观察有否有菌体出现。如有淡棕色菌体出现,应每隔5-10min观察一次以控制菌体着色深浅,直至显色理想。
6.入蒸馏水中清洗。
7.用氯化金溶液调色1~2min。蒸馏水洗1~2min。
8.置于海波溶液2min。流水冲洗5min。
9.滴加橙黄G一小滴复染1s即用水冲洗。染色时间不能过长,否则将影响最终效果。
10.流水冲洗20s-60s。
11.常规脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
染色结果:
注意事项:
1.实验中所用玻璃器皿,应预先用硫酸洗液浸泡并用蒸馏水冲洗干净,烤干。
2.六胺银工作液配制后应先放入温箱中预热,温度要达到60℃时,再放人切片进行染色。如用水浴锅代替恒温箱,需将温度设定在48-50摄氏度,否则切片会很快变黑而难以掌握。一般建议在恒温箱中孵育染色。
3.在低倍镜检时,菌体不宜着色太黑,否则在高倍镜下观察则不够清晰透亮,特别需注意菌体成堆的地方的显色。配制好的六胺银工作液是一次性的,不能久放。
4.氯化金调色时,一定要在显微镜下观察。
5.橙黄G一定要淡染,时间不能过长。
6.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件:4℃,避光6个月。