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构建有效靶向小鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)基因的短发卡RNA(shRNA)载体。方法针对小鼠HMGB1序列设计4条HMGB1干扰序列的shRNA载体:pYr-1.1-musHMGB1-sh1~4以及与哺乳动物基因组无同源性序列的shRNA作为对照(NC)组,XhoI酶切鉴定其序列。然后利用质粒转染小鼠肝癌细胞株Hepal-6,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测干扰效率。结果经酶切凝胶电泳证实shRNA构建正确;质粒筛选结果表明,转染48h后,pYr-1.1-musHMGB1-sh1~4及NC组的荧光表达率为85%、78%、75%、70%、60%;FQ-PCR显示pYr-1.1-musHMGB1-sh1~4组及NC组转染Hepal-6细胞48h后相对表达量分别为0.52±0.05、0.59±0.08、0.61±0.08、0.57±0.21、1.02±0.21。结论成功构建表达靶向HMGB1的4条shRNA重组质粒载体,其中pYr-1.1-musHMGB1-sh1质粒对HMGB1基因的抑制作用最强,为研究HMGB1的功能提供实验基础。

目的探讨胃黏膜下层作为自体胰岛移植部位的可行性及有效性。方法全胰切除建立Beagle犬糖尿病模型(n=6);改良Ricordi法,分离切取自体胰腺的胰岛细胞。按~IEQ/kg剂量,将自体胰岛细胞移植入犬胃黏膜下层(n=6);术后6、12、24、48h检测血糖和C肽水平。48h后,切取胰岛移植部位的胃组织,苏木素-伊红(HE)染色及Insulin染色观察胃黏膜下层胰岛移植物的存活情况。结果全胰切除术后6h,Beagle犬血糖为(11.95±1.06)mmol/L;术后2和5d,静脉葡萄糖耐量试验(IVGTT)2h后血糖分别为(25.73±6.60)mmol/L和(23.13±9.35)mmol/L,符合糖尿病诊断标准。自体胰岛移植术后6h,犬血糖降至(5.30±2.52)mmol/L,且48h内血糖均维持在11.1mmol/L以下。胰岛移植术后6、12、24、48h,犬C肽水平与术前比较明显升高。HE和Insulin染色均在胃黏膜下层检测到了存活良好的自体胰岛。结论胃黏膜下层可作为自体胰岛移植部位,为该部位在未来临床胰岛移植的应用奠定了基础。

目的探讨瘦素(Leptin)、神经肽Y(NPY)、阿片促黑素细胞皮质素原(POMC)信号通路在胃转流手术治疗2型糖尿病中的作用及机制。方法采用20只成年SD雄性大鼠成功建立2型糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病非手术对照组(NO组,n=10)和糖尿病手术组[Roux-en-Y胃旁路术(RYGB)组,n=10],另外再选10只正常大鼠作为正常对照组(NC组),对手术组实施胃转流手术,分别于术前、术后检测各组大鼠血糖(GLU)、总胆固醇(TCH)及甘油三酯(TG)、Leptin水平,每天定时监测大鼠饮水量、饮食量以及体质量的变化,术后第4周取大鼠下丘脑,检测下丘脑中NPY、POMCmRNA的表达水平。结果术后第4周,RYGB组大鼠血糖、血脂以及进食、水量已接近正常水平,Leptin和NPYmRNA水平分别由术前的(4.58±0.37)μg/L、1.89±0.24降低到(3.10±0.38)μg/L、0.95±0.19(Plt;0.01),而POMCmRNA水平则由术前的0.78±0.26升高至1.70±0.31(Plt;0.01)。结论胃转流手术可以改善2型糖尿病的血糖水平,Leptin可能通过NPY、POMC神经元信号调节2型糖尿病的能量代谢平衡,提示Leptin与下丘脑NPY、POMC调节通路可能在胃转流手术后2型糖尿病病情缓解过程中发挥重要作用。