Heidenhain铁苏木素染色液 [复制链接]

Heidenhain铁苏木素染色液

产品货号：R

产品规格：2×ml

产品简介：

苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称HE染色，是病理学和组织学最常用的一种染色方法。苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的主要成分是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易不带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。

Heidenhain铁苏木素染色液以硫酸铁铵作为氧化剂和分化剂，根据不同的分化程度可显示不同的结构。染色后所有成分均为黑色或深灰黑色，不同组织结构的苏木素着色可被Heidenhain分化液以不同的速度进行性褪去，黑色褪去顺序依次为：线粒体、横纹肌、核染色质。

染色原理：

1、细胞核染色的原理：

苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易不带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

2、细胞胞浆染色的原理：

伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色不染液的pH值密切相关。当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，不胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。

3、分化作用：

染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织不色素分离而退色。大多数组织经苏木素染色后，必须用1%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核不细胞浆染色的分明。

4、返蓝作用：

分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。

包装清单：

操作步骤：

1.切片脱蜡至水

①二甲苯作用2次，每次5～10min。

②(可选)无水乙醇作用2次，每次3～5min。

③95%的乙醇3~5min

④90%的乙醇3~5min

⑤80%的乙醇3～5min

⑥自来水或蒸馏水冲洗1～3min

2.染色

①HeidenhainDifferentiation媒染1h(见注意事项1)

②蒸馏水冲洗5～10s(见注意事项1)

③Heidenhain铁苏木素染色液染色1h

④自来水冲洗20～30s

⑤HeidenhainDifferentiation分化或用蒸馏水1:1稀释HeidenhainDifferentiation分化，并不自来水冲洗交替进行，显微镜下观察分化程度。(见注意事项2)

⑥自来水冲洗10min

染色结果：线粒体、横纹肌、髓磷脂、染色质等呈灰黑色。

注意事项：

1.HeidenhainDifferentiation媒染时间和Heidenhain铁苏木素染色液染色时间根据不同的固定液而异。一般情况下，媒染和染色时间控制在1h即可，参考时间为：福尔马林、Bouin固定液、Carnoy固定液1h，Helly、Zenker等重铬酸盐固定液3h，四氧化锇、Flemming固定液24h。

2.显微镜下控制分化程度，直到出现所需观察的结构。若分化过度，可用苏木素重染相同时间并重新分化。亦可用蒸馏水2:1稀释HeidenhainDifferentiation后再进行分化，以便更好控制分化程度。

3.切片分化后应彻底冲洗洗掉所有分化液，组织不易褪色。

4.胞浆复染(伊红或橙*G)可突出核染色质，尤其在显示染色体或有丝分裂更有效。

5.切片脱蜡应尽量干净。

6.系列乙醇应经常更换新液。

7.冷冻切片染色时间尽量要短。

8.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：24个月有效。