Core苏木素染色液说明书 [复制链接]

Core苏木素染色液

产品简介：

苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称HE染色，是病理学和组织学最常用的一种染色方法。苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的主要成分是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易不带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。

Core苏木素染色液是一种化学氧化成熟的明矾苏木素，主要由苏木精、硫酸铝钾、甘油等组成。染色液中苏木精含量量小，无氧化膜形成，对细胞核染色很清晰，不着染胞质和纤维成分，属进行性染色，故染色后可以不用盐酸乙醇分化，染色时间约5～10min，主要用于复染细胞核。

染色原理：

1.细胞核染色的原理：

苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易不带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

2.细胞浆染色的原理：

伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色不染液的pH值密切相关。当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，不胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。

3.分化作用：

染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织不色素分离而退色。大多数组织经苏木素染色后，必须用1%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核不细胞浆染色的分明。

4.返蓝作用：

分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。

产品组成：

自备材料：

1.盐酸乙醇分化液

2.蓝化液，如稀氨水、碳酸锂溶液等

3.系列乙醇

4.伊红染色液

5.4%多聚甲醛

操作步骤(仅供参考)：

（一）石蜡切片染色

1.切片脱蜡至水

(1)二甲苯作用2次，每次5～10min。

(2)(可选)无水乙醇作用2次，每次3～5min。

(3)95%的乙醇3～5min3～5min

(4)90%的乙醇3～5min

(5)80%的乙醇3～5min

(6)自来水或蒸馏水冲洗1～3min

2.染色

(1)Core苏木素染色液染色5～10min

(2)自来水或蒸馏水冲洗5～10s

(3)(可选)盐酸乙醇分化2～5s

(4)自来水冲洗20～30s

(5)(可选)蓝化液返蓝20～40s

(6)自来水冲洗30～60s

(7)伊红染色液染色3～5min

(8)自来水冲洗1～5s

3.脱水、透明、封固

(1)80%乙醇10～20s

(2)90%乙醇10～20s

(3)95%乙醇作用2次，每次1～2min。

(4)无水乙醇作用2次，每次2～3min。

(5)二甲苯透明3次，每次2～3min。

(6)中性树脂封片。

染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、肌纤维、胶原纤维等呈深浅不一的红色；角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。

（二）冰冻切片染色

(1)乙醚-乙醇混合固定液5～10s

(2)自来水冲洗2～5s

(3)Core苏木素染色液滴染1～2min(可加热至50℃)。

(4)自来水冲洗2～5s

(5)(可选)盐酸乙醇分化2～5s

(6)自来水冲洗2～5s

(7)(可选)蓝化液返蓝2～5s

(8)自来水冲洗5～10s

(9)伊红染色液染色2～5s

(10)自来水冲洗1～2s

(11)80%的乙醇1～2s

(12)95%的乙醇2～5s

(13)无水乙醇2～5s

(14)苯酚二甲苯(1:3)2～5s

(15)二甲苯透明3次，每次2～5s

(16)中性树脂封片

染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。

（三）细胞染色

(1)4%多聚甲醛固定10～20min。

(2)自来水冲洗2次，每次2min。

(3)蒸馏水冲洗2次，每次2min。

(4)染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤，作用时间应相应缩短。

染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。