苏木

注册

 

发新话题 回复该主题

SOP文件酸性磷酸酶染色ACP洒 [复制链接]

1#
目的:提高血细胞认知的准确率,有助于某些血液病的诊断。原理:细胞中的ACP能使底物萘酚AS-BI磷酸水解,释放出不溶性萘酚,后者与偶氮染料坚固石榴红结合,形成有色的物质。L(+)酒石酸能掏酸性磷酸酶同功酶1-4活性,而不能抑制同功酶5。试剂:1、固定液:先将丙酮60ml与0.03mol/L枸橼酸溶液40ml混匀,取其中90ml与甲醇10ml混合,用1mol/LNAOH调至PH5.4,在4-10℃下保存,用前轻轻摇匀,该溶液可稳定1个月。2、底物贮存液:mg萘酚AS-BI磷酸溶解于N,N-二甲基酰胺10ml中,该贮存液保存在2-10℃可稳定2个月。3、底物染色液1号(不含酒石酸):取0.1mol/L醋酸盐缓冲液(PH5.2)50ml与底物贮存液1ml及坚固石榴红GBC25mg混匀,用滤纸过滤;4、酒石酸溶液:称取L(+)酒石酸3.75g,溶解于0.1mol/L醋酸盐缓冲液(PH5.2)ml中,用NaOH溶液调节至PH5.2,用蒸馏水加至总量ml,置4~10℃保存。5、底物染色液2号(内含酒石酸):取酒石酸溶液50ml,与底物贮存液1ml及坚固石榴红GBC25mg混合,用滤纸过滤。操作步骤:1、置二张新鲜制备的血涂片(或骨髓片)于固定液中固定30s(4~10℃)。2、用蒸馏水冲洗片子3次,置室温10~30min使干燥。3、将1张已固定涂片置底物染色液1号中;另1张已固定涂片置底物染色液2号(内含酒石酸)中,37℃下温育45min。4、用流水冲洗。5、用Mayer苏木素复染液复染1~3min。用流水冲洗,空气干燥后置显微镜下检查。结果判断:凡有紫红色颗粒者为阳性。附注:ACP染色也有用Gomori硫化铅法,但因其操作复杂而且结果不稳定,现已被本法所取代。临床意义:1、在ACP染色中,原粒细胞为阴性,早幼粒、中幼粒及晚幼粒细胞为中度阳性,成熟中性粒细胞为弱阳性。幼稚及成熟单核细胞为弱至强阳性(血象中单核细胞大多为弱阳性)。淋巴细胞为极弱阳性。浆细胞及巨核细胞呈中度阳性。血小板为弱阳性。幼红及成熟红细胞则为阴性。2、协助诊断毛细胞白血病:毛细胞常表现为中度阳性至强阳性,而且具有抗L(+)酒石酸掏的特性(RPAP)。但并非所有毛细胞白血病细胞都是TRAP阳性。3、区别淋巴细胞的类型:T淋巴细胞经ACP染色常为阳性,因此在约86%的急性T淋巴细胞白血病患者中有90%~99%白血病细胞为阳性。而在10%的急性非T、非B淋巴细胞白血病细胞中仅0~23%为阳性。4、用于鉴别细胞:鉴别浆细胞、骨髓瘤细胞(阳性或强阳性)与淋巴细胞(阴性或弱阳性);传染性单核细胞增多症中异常淋巴细胞(阳性)与正常淋巴细胞(阴性或弱阳性);高雪细胞(Gaucher)(强阳性)与尼曼-匹克(Niemann-Pick)细胞(阴性)。●全套肿瘤标志物、激素类的临床意义●95项检验项目临床意义汇总●乙肝五项(两对半):32种可能组合●不合格标本对检验结果影响●质量失控常见原因汇总,必须收藏!有用,就点一个“在看”吧戳原文,检验医学推荐用书!预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇
分享 转发
TOP
发新话题 回复该主题