病理冷冻制片技术的个人体会 [复制链接]

病理冷冻制片技术的个人体会

白阳沈医院

冷冻(冰冻)切片是采用冷冻的方法使组织在较短时间变硬切成薄片，其原理是利用物理降温的方法，使组织达到一定的硬度进行切片的一种方法。由于制片迅速，是临床快速诊断重要的一环，制片质量的好坏将直接影响术中的诊断。因此,要制作出高质量的冷冻切片,需注意以下几个方面/p>

一、取材注意事项

1.取材时需要冷冻的组织禁止用水冲洗，以防冰晶的形成对组织形态造成破坏。切忌将组织浸入生理盐水中或甲醛固定。甲醛固定组织低于10分钟对制出的切片尚无影响。如图片（图1、2）常规术中冰冻切片与经甲醛固定30分钟后冷冻切片对比。

图1常规术中冰冻切片的甲状腺组织

图2经甲醛固定30分钟后冷冻切片的甲状腺组织

2.尽量去除淋巴结周围多余的脂肪组织。

3.取材刀片应足够锋利，切勿用拉锯式切割组织，钳夹组织时不要用有齿镊子，并注意手法轻柔，切勿用力挤压使组织产生人为变形。

4.取材大小尤为重要，应以1.5cm×1.5cm×0.3cm较合适.组织厚度应在0.3-0.5cm，太厚影响组织冷冻速度,会有大量冰晶形成。

二、包埋注意事项

1.包埋前先用包埋剂制作出一个冻托，之后将组织快速埋于其中，调整组织位置使其居中并处于一个平面上，便于切片。

2.使用较稀薄的日用胶水包埋小组织，切片后组织周围胶印不易洗脱，可在染苏木素染色前用清水泡1分钟。

3.对于特殊组织如囊壁、胃肠道及管腔样组织等需要竖立包埋，保证制作出的切片呈现完整的组织结构。

三、温度的调节

1.切片机箱体中的温度常规设定为-25℃左右，保持24小时处于备用状态，防止频繁开关机对压缩机造成损坏。

2.在实际工作中要根据送检组织类型设定适宜的冷冻温度及时间，温度过低会造成组织过硬、过脆，易出现空泡及组织破碎的情况；温度过高则会导致切片粘度增加不易成片。

3.不同组织的冷冻温度和时间不同，如表：

冷冻切片机温度设置的参考值

4.为了加快组织的冷冻，我们可以选择冷冻锤来加速冷冻。

冷冻锤的使用：太早，组织挤压变形；不用，有的组织冰晶产生多。

时机：组织冷冻达1/2-2/3时使用冷冻锤，根据组织的不同而定，一般大概1-2分钟左右，肉眼观察，冻住的组织会变色，如图：（图3、4、5）

图3刚放入冷台的组织

图4组织冷冻达1/2-2/3时

图5使用冷冻锤

四、切片注意事项

1.根据组织类型调节不同的切片厚度，普通组织类型一般控制为5-6μm，对于细胞致密的组织可薄切至3-4μm，对于细胞含量稀疏、纤维致密的组织应适当增加切片厚度，对于脂肪组织甚至要调到10-15μm才能制作出完整的切片。

2.在同一“标本托”放大小两块组织时，应尽量冻成一个平面，以防切片不完整，发生漏诊，但应避免同时冷冻两粒以上的淋巴结组织。

3.切片过程要用力均匀、柔和，防止切片厚薄不均或有皱褶出现，如果切片皱在一起时，不能完整出片，应适当调整防卷板和刀口的位置，待切出完整切片后，先让组织一端粘于载玻片上，然后轻轻一拉，这样可以使组织较平整的收到载玻片上。

4.脂肪组织可用防脱载玻片或固定后用吹风机吹干防止组织脱片。

5.甲状腺、肝、肾等组织在冷冻时不要时间过长，冻住80%-90%就可开始粗切，修除尚未冻住的部分并立即切片。

6.皮肤组织使表皮面向上进行切片。

7.子宫肌瘤、宫颈或乳腺纤维腺瘤等组织由于组织过硬，应将切片机样本夹头和刀座上的螺丝拧紧，以防切片一截厚一截薄，呈阶梯状。8.组织块较小或病变区域较小时，修片幅度要小，靠近所需区域时应用“转动”转轮继续修片，直至最大面，然后留片。

五、固定注意事项

1.切下的组织贴到玻片上后要立即固定，因为组织在空气中过久容易产生组织变性、着色力下降，导致染色后组织结果模糊不清。

2.固定要达到规定的时间，一般为20秒左右，不超过1分钟。

3.固定剂的选择会影响染色效果，选择AAF固定液进行固定，整体效果佳。

4.固定液要保持新鲜，注意及时更换。

六、染色注意事项

1.冰冻切片取材来自新鲜标本，多数肿瘤组织水分含量较高，这会降低组织对染液的亲和力，所以对于疑似恶性肿瘤组织，要适当延长苏木素染色时间。

2.对于细胞致密的组织如淋巴结、脑组织等，要降低苏木素的染色时间，通常不超过1分钟。

3.染色液使用时间过长会导致着色能力下降，细胞结构模糊不清，因此要保持新鲜，定期进行更换。

编辑及校对滕猛沈医院

年10月27日