AbMole科研硫氧还蛋白相互作用蛋白 [复制链接]

AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：硫氧还蛋白相互作用蛋白调控NOD样受体蛋白3炎症小体的机制。

炎症反应在DN中起着重要作用；本研究的目的是研究硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)轴介导的DN中NLRP3炎性体激活的作用。注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型。然后使用苏木精和伊红(HE)染色和链霉亲和素-过氧化物酶染色分别检查肾组织形态以及TXNIP和NLRP3蛋白表达水平。此外，还应用了RNA干扰技术来沉默TXNIP基因。TXNIP和NLRP3炎症小体激活相关蛋白和mRNA分别通过蛋白质印迹分析和RT-qPCR检测。还使用酶联免疫吸附试验检测白细胞介素(IL)-1和IL-18的表达，同时使用流式细胞术检测活性氧的产生。数据显示TXNIP和NLRP3在DN大鼠肾组织中过表达，抗氧化基因水平下调。还观察到葡萄糖以时间依赖性和剂量依赖性方式促进TXNIP表达和NLRP3炎症小体的激活，从而促进炎症反应。TXNIP基因的沉默导致NLRP3炎症小体激活的下调，并抑制了高糖环境中IL-1和IL-18的表达水平。此外，TXNIP的低表达促进了抗氧化基因的水平并降低了ROS水平。总之，高糖环境能够通过促进TXNIP的表达和NLRP3炎性体的激活来上调炎症因子的水平，从而参与DN。

Phosphataseinhibitors（Abmole，M）在Westernblot实验中用于防止研究中蛋白和脂类的磷酸化状态丢失，为蛋白磷酸化提供更加全面的保护。

Figure2.ExpressionlevelsofTXNIPandNLRP3inflammasomeassociatedproteinsinrenaltissueofDNrats.

进行蛋白质印迹分析以检测TXNIP和NLRP3炎症小体蛋白以及许多炎症因子的水平。结果表明，DN组TXNIP、NLRP3、cleaved-caspase-1、IL-1和IL-18的水平显著高于对照组（P0.05；图2A和B）。这表明高葡萄糖水平促进了TXNIP表达和NLRP3炎性体激活。

Figure3.AntioxidantgeneexpressionlevelsinDNrats.

通过蛋白质印迹分析和RT-qPCR分别检测过氧化氢酶和MnSOD的蛋白质和mRNA表达水平。实验结果表明，与对照组相比，DN组中过氧化氢酶和MnSOD蛋白和mRNA的表达水平显著降低（P0.01；图3A-C）。ELISA结果还显示DN组SOD表达水平显着降低，而MDA水平显著升高（图3D和E）。这些结果表明DN大鼠肾脏的抗氧化能力降低。

Figure4.EffectsofdifferentconcentrationsofglucoseonTXNIPexpressionandtheactivationofNLRP3inflammasomeinHK2cells.

进行蛋白质印迹分析以检测对照、HG1、HG2和HG3组的HK-2细胞中TXNIP、NLRP3、cleaved-caspase-1和caspase-1蛋白的表达水平。结果表明，随着培养基中葡萄糖浓度的增加，TXNIP、NLRP3和cleaved-caspase-1蛋白水平逐渐升高，而caspase-1蛋白水平下降（图4A和B）。ELISA结果还显示，随着培养基中葡萄糖浓度的升高，IL-1和IL-18的分泌水平增加（图4C和D）。这表明葡萄糖以剂量依赖性方式促进TXNIP的表达和NLRP3炎性体的激活，并增强炎症反应。